PPARγ調(diào)控乳脂肪合成的研究

　　本書采用組織塊培養(yǎng)法構(gòu)建奶牛乳腺上皮細(xì)胞（DCMECs）模型。DCMECs添加乳脂肪合成前體物乙酸鈉、β-羥基丁酸鈉、乙酸鈉和β-羥基丁酸鈉混合物、軟脂酸和硬脂酸，qRT-PCR檢測DCMECs脂肪酸攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)、活化相關(guān)蛋白基因、脂肪酸從頭合成、去飽和酶基因、甘油三酯合成酶相關(guān)基因和乳脂肪合成轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子相關(guān)基因的mRNA表達(dá)，Western blotting檢測乳脂肪合成轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的蛋白表達(dá)，酶活性試劑盒檢測甘油三酯合成酶活性變化，采用細(xì)胞免疫熒光法檢測PPARγ的胞內(nèi)定位情況。對DCMECs 的PPARγ進(jìn)行基因沉寂和超表達(dá)，通過培養(yǎng)基中甘油三酯含量確定PPARγ基因沉寂和超表達(dá)的DCMECs對各脂肪酸的濃度需求變化，同時采用qRT-PCR、Western blotting和酶活性試劑盒檢測各脂肪酸對PPARγ基因沉寂和超表達(dá)的DCMECs乳脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子蛋白表達(dá)及甘油三酯合成酶活性的影響。劉莉莉，黑龍江人，東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物生物化學(xué)與分子生物學(xué)專業(yè)博士。2007年7月至今，工作于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)生物技術(shù)制藥教研室，從事分子生物學(xué)、生物技術(shù)原理、生物技術(shù)制藥、現(xiàn)代生物技術(shù)概論、藥學(xué)生物技術(shù)概論、生物藥物分離純化等多門理論課程和實(shí)驗課程的教學(xué)，有扎實(shí)的理論基礎(chǔ)，并擅長分子生物學(xué)實(shí)驗、動物細(xì)胞培養(yǎng)和基因的功能研究等。

　　本書采用組織塊培養(yǎng)法構(gòu)建奶牛乳腺上皮細(xì)胞（DCMECs）模型。DCMECs添加乳脂肪合成前體物乙酸鈉、β-羥基丁酸鈉、乙酸鈉和β-羥基丁酸鈉混合物、軟脂酸和硬脂酸，qRT-PCR檢測DCMECs脂肪酸攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)、活化相關(guān)蛋白基因、脂肪酸從頭合成、去飽和酶基因、甘油三酯合成酶相關(guān)基因和乳脂肪合成轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子相關(guān)基因的mRNA表達(dá)，Western blotting檢測乳脂肪合成轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的蛋白表達(dá)，酶活性試劑盒檢測甘油三酯合成酶活性變化，采用細(xì)胞免疫熒光法檢測PPARγ的胞內(nèi)定位情況。對DCMECs 的PPARγ進(jìn)行基因沉寂和超表達(dá)，通過培養(yǎng)基中甘油三酯含量確定PPARγ基因沉寂和超表達(dá)的DCMECs對各脂肪酸的濃度需求變化，同時采用qRT-PCR、Western blotting和酶活性試劑盒檢測各脂肪酸對PPARγ基因沉寂和超表達(dá)的DCMECs乳脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子蛋白表達(dá)及甘油三酯合成酶活性的影響。劉莉莉，黑龍江人，東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物生物化學(xué)與分子生物學(xué)專業(yè)博士。2007年7月至今，工作于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)生物技術(shù)制藥教研室，從事分子生物學(xué)、生物技術(shù)原理、生物技術(shù)制藥、現(xiàn)代生物技術(shù)概論、藥學(xué)生物技術(shù)概論、生物藥物分離純化等多門理論課程和實(shí)驗課程的教學(xué)，有扎實(shí)的理論基礎(chǔ)，并擅長分子生物學(xué)實(shí)驗、動物細(xì)胞培養(yǎng)和基因的功能研究等。