生物化學實驗

第一部分生物化學實驗技術(shù)基礎
第1章生物化學實驗須知1
1.1生物化學實驗的目的1
1.2生化實驗室實驗規(guī)則1
1.3生化實驗室安全及防護知識2
1.3.1實驗室安全知識2
1.3.2實驗室急救3
1.4實驗誤差與數(shù)據(jù)處理4
1.4.1系統(tǒng)誤差4
1.4.2偶然誤差4
1.4.3操作錯誤5
1.4.4數(shù)據(jù)處理5
1.5實驗報告6
第2章分光光度技術(shù)7
2.1分光光度技術(shù)原理7
2.1.1光譜7
2.1.2光吸收定律8
2.2分光光度計的構(gòu)造10
2.2.1光源10
2.2.2單色光器10
2.2.3比色皿12
2.2.4檢測器12
2.37220型分光光度計13
2.3.1儀器外部結(jié)構(gòu)及各部分名稱和功能13
2.3.2儀器使用方法15
2.3.3注意事項15
2.4分光光度技術(shù)在生化試驗技術(shù)中的應用16
第3章離心技術(shù)17
3.1離心技術(shù)的基本原理17
3.2離心機的類型和主要構(gòu)造18
3.2.1離心機的類型18
3.2.2離心機的主要構(gòu)造19
3.3離心方法的選擇21
3.3.1差速離心21
3.3.2密度梯度離心21
3.4離心條件的確定22
3.4.1離心力22
3.4.2離心時間22
3.4.3溫度23
3.4.4pH值23
第4章色譜技術(shù)24
4.1色譜技術(shù)原理24
4.2色譜的基本概念24
4.2.1固定相與流動相24
4.2.2分配系數(shù)與遷移率24
4.2.3分離度（分辨率）25
4.2.4交換容量（或操作容量）26
4.2.5正相色譜與反相色譜26
4.3色譜技術(shù)的分類26
4.3.1按流動相固定相分類26
4.3.2按實驗方法分類27
4.3.3按分離的機制分類27
4.4常用的幾種色譜技術(shù)28
4.4.1紙色譜28
4.4.2薄層色譜30
4.4.3離子交換色譜32
4.4.4凝膠色譜35
4.4.5高效液相色譜41
4.4.6氣相色譜49
4.4.7親和色譜51
第5章電泳技術(shù)60
5.1電泳的基本原理60
5.1.1電荷的來源60
5.1.2泳動度60
5.1.3影響電泳的主要因素61
5.2電泳的分類62
5.2.1按分離原理分類62
5.2.2按分離目的分類63
5.2.3按用途分類63
5.3常用的電泳技術(shù)63
5.3.1紙電泳63
5.3.2醋酸纖維薄膜電泳65
5.3.3瓊脂糖凝膠電泳66
5.3.4聚丙烯酰胺凝膠電泳67
5.3.5毛細管電泳72
5.3.6免疫電泳技術(shù)73
5.3.7等電聚焦電泳74
5.3.8雙向凝膠電泳77
第二部分生物化學實驗
第6章生物化學基礎實驗79
實驗1糖的顏色反應和還原性鑒定79
Ⅰ.莫氏（Molisch）反應鑒定糖79
Ⅱ.塞氏（Seliwanoff）反應鑒定酮糖81
Ⅲ.杜氏（Tollen）反應鑒定戊糖82
Ⅳ.糖的還原性鑒定82
實驗2植物組織中可溶性糖含量測定——蒽酮比色法84
實驗3還原糖和總糖的測定——3,5-二硝基水楊酸法87
實驗4血糖的定量測定90
Ⅰ.鄰甲苯胺法測定血糖含量90
Ⅱ.葡萄糖氧化酶法測定血糖含量（GOD-PAP法）92
實驗5淀粉的提取、性質(zhì)和含量測定93
實驗6肝糖原的提取和鑒定96
實驗7粗脂肪的含量測定——索氏抽提法97
實驗8油脂的化學性質(zhì)99
Ⅰ.油脂皂化值的測定99
Ⅱ.油脂酸值的測定101
Ⅲ.油脂碘值的測定101
實驗9卵磷脂的提取及鑒定104
實驗10血清總膽固醇的定量測定105
Ⅰ.磷硫鐵法測定血清膽固醇106
Ⅱ. Abell法測定血清膽固醇107
Ⅲ.膽固醇氧化酶法測定血清膽固醇108
實驗11蛋白質(zhì)的顏色反應和沉淀作用110
Ⅰ.蛋白質(zhì)的顏色反應110
Ⅱ.蛋白質(zhì)的沉淀反應113
實驗12蛋白質(zhì)濃度測定（微量凱氏定氮法）115
實驗13蛋白質(zhì)含量測定——紫外吸收法117
實驗14蛋白質(zhì)的含量測定（二）——雙縮脲法、考馬斯亮藍結(jié)合法、BCA法119
Ⅰ.雙縮脲法測定蛋白質(zhì)濃度119
Ⅱ.考馬斯亮藍結(jié)合法測定蛋白質(zhì)濃度121
Ⅲ. BCA法測定蛋白質(zhì)含量122
實驗15非蛋白氮（NPN）的測定124
實驗16DNP、DNS-氨基酸的制備和鑒定126
實驗17肽的序列分析——PTH法130
實驗18醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白132
實驗19SDS-聚丙烯酰胺電泳法測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量134
實驗20血清白蛋白的分離與純化138
實驗21葡聚糖凝膠柱色譜分離純化蛋白質(zhì)140
實驗22火箭免疫電泳143
實驗23核酸的含量測定144
實驗24DNA瓊脂糖凝膠電泳147
實驗25動物肝臟中DNA的提取與紫外檢測148
實驗26CTAB法提取植物基因組DNA150
實驗27酵母RNA的提取與鑒定152
實驗28質(zhì)粒DNA的提取153
實驗29肝臟中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力測定155
實驗30過氧化氫酶米氏常數(shù)的測定157
實驗31測定多種因素對唾液淀粉酶活力的影響159
實驗32豬血中超氧化物歧化酶（SOD）的提取及活力測定161
實驗33多酚氧化酶的制備和化學性質(zhì)163
實驗34維生素A的定性測定164
實驗35維生素B1的定性測定165
實驗36維生素C的定量測定（磷鉬酸法）167
第7章綜合應用型實驗170實驗37溶菌酶的提純和活力測定170
實驗38蘆薈多糖的制備和含量測定172
實驗39發(fā)酵過程中的無機磷和ATP檢測174
實驗40胰島素和腎上腺素對血糖濃度的影響176
實驗41葉綠體色素的提取、分離和含量測定178
實驗42用正交法測定幾種因素對牛胰蛋白水解酶活力的影響180
實驗43DNA聚合酶鏈式反應及產(chǎn)物鑒定（PCR）184
實驗44氣相色譜法檢測果蔬中有機氯類和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥186
實驗45質(zhì)粒DNA的提取、酶切及鑒定189
實驗46漢防己中生物堿的提取、分離和鑒定192
第8章設計性實驗195
實驗47果皮廢棄物中果膠的制備195
實驗48茶葉中茶多酚物質(zhì)的提取與含量測定196
實驗49蛋白質(zhì)的表達、分離、純化和鑒定197
附錄198
附錄1常用緩沖液的配制198
附錄2硫酸銨飽和度常用表203
附錄3常見蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量參考值（單位：Da）204
附錄4色譜法常用數(shù)據(jù)及性質(zhì)205
附錄5各類物質(zhì)常用的薄層顯色劑208
附錄6凝膠染料的種類及特點209
參考文獻210