生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗技術(shù)教程（第二版）

第二版前言
第一版前言
第一章 生物化學(xué)與分子生物學(xué)中的定量分析
第一節(jié) 滴定分析法
一、基本原理
二、標(biāo)準(zhǔn)溶液
三、滴定分析的計算
四、減小滴定誤差的方法
第二節(jié) 紫外可見分光光度法
一、基本原理
二、分光光度計的主要部件
三、分光光度法的定性和定量
四、減小測定誤差的方法
第三節(jié) 熒光分析法
一、基本原理
二、熒光儀的主要部件
三、熒光分析法的定性和定量
四、減小測量誤差的方法
第四節(jié) 酶活力及動力學(xué)數(shù)據(jù)的測定
一、酶活力的測定
二、Km和Vmax的測定
三、其他動力學(xué)數(shù)據(jù)的測定
實驗1-1 粗脂肪的提取和定量測定
實驗1-2 碘價的測定(Hanus法)
實驗1-3 皂化價的測定
實驗1-4 酸價的測定
實驗1-5 脂肪乙酰價的測定
實驗1-6 蛋白質(zhì)的測定(凱氏定氮法)
實驗1-7 2，6-二氯酚靛酚法測定維生素C的含量
實驗1-8 碘量法測定維生素C的含量
實驗1-9 血糖定量測定(GOD-PAP法)
實驗1-10 蒽酮比色定糖法
實驗1-11 3，5-二硝基水楊酸法測定還原糖含量
實驗1-12 血清膽固醇的定量測定(磷硫鐵法)
實驗1-13 血清總膽固醇的測定(鄰苯二甲醛法)
實驗1-14 雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量
實驗1-15 Folin試劑法(Lowry法)測定蛋白質(zhì)含量
實驗1-16 考馬斯亮藍(lán)染色法測定蛋白質(zhì)含量
實驗1-17 紫外吸收法測定蛋白質(zhì)含量
實驗1-18 紫外吸收法測定核酸含量
實驗1-19 二苯胺顯色法測定DNA含量
實驗1-20 地衣酚顯色法測定RNA含量
實驗1-21 定磷法測定核酸含量
實驗1-22 熒光法測定維生素B2含量
實驗1-23 血清丙氨酸氨基移換酶(ALT)的測定
實驗1-24 酸性磷酸酯酶的測定
實驗1-25 堿性磷酸酶的反應(yīng)動力學(xué)性質(zhì)
第二章 生物大分子的提取、沉淀和離心分離
第一節(jié) 生物大分子的提取
一、材料的選擇與處理
二、確定測定方法
三、細(xì)胞的破碎
四、抽提
第二節(jié) 沉淀分離技術(shù)
一、蛋白質(zhì)的沉淀分離
二、核酸的提取與沉淀分離
三、多糖和小分子活性成分的提取和分離
第三節(jié) 膜分離技術(shù)
一、膜分離技術(shù)的分類
二、膜的分類和性質(zhì)
三、膜的特性
四、透析
五、微濾、超濾和反滲透
第四節(jié) 提取物的濃縮、結(jié)晶和干燥
一、濃縮
二、結(jié)晶
三、干燥
第五節(jié) 離心分離技術(shù)
一、離心機(jī)的種類與用途
二、離心分離方法的選擇
三、離心條件的確定
四、離心操作的注意事項
實驗2-1 香菇多糖的制備
實驗2-2 卵磷脂的制備
實驗2-3 大蒜細(xì)胞SOD的提取與分離
實驗2-4 菜花(花椰菜)中核酸的分離和鑒定
實驗2-5 酵母RNA的提取與分離
實驗2-6 從肝臟中提取DNA
實驗2-7 大腸桿菌細(xì)胞膜的分離
實驗2-8 大鼠肝細(xì)胞核的分離
第三章 層析技術(shù)
第一節(jié) 吸附層析
一、吸附柱層析
二、聚酰胺薄膜層析
第二節(jié) 分配層析
一、概述
二、紙層析
第三節(jié) 凝膠層析
一、基本原理
二、凝膠的選擇
三、操作
第四節(jié) 離子交換層析
一、基本原理
二、離子交換劑
三、操作
第五節(jié) 親和層析
一、配基與偶聯(lián)凝膠的選擇與處理
二、親和層析的操作條件
第六節(jié) 薄層層析
一、支持劑的選擇與處理
二、薄層板的制作
三、層析方法
第七節(jié) 氣相色譜
一、基本原理
二、氣相色譜的氣路系統(tǒng)
三、色譜柱
四、檢測器
五、定性和定量方法
第八節(jié) 高效液相色譜
一、概述
二、HPLC的特點
三、HPLC的分類
四、HPLC的儀器構(gòu)成
五、定性定量方法
實驗3-1 氨基酸的紙層析
實驗3-2 微晶纖維素薄板層析法分離氨基酸
實驗3-3 核苷酸的離子交換層析
實驗3-4 DNS-氨基酸的聚酰胺薄膜層析
實驗3-5 凝膠層析測定蛋白質(zhì)的Mr
實驗3-6 胰蛋白酶的親和層析
實驗3-7 醇酯成分的氣相層析
實驗3—8 HPLC法測定生物類黃酮含量
實驗3—9 HPLC法測定維生素A含量
第四章 電泳技術(shù)
第一節(jié) 基本原理
一、泳動度
二、影響泳動度的因素
第二節(jié) 乙酸纖維素薄膜電泳
第三節(jié) 瓊脂糖凝膠電泳
一、瓊脂糖凝膠的特點
二、DNA的瓊脂糖凝膠電泳
三、印跡轉(zhuǎn)移電泳
四、交變脈沖電場凝膠電泳
第四節(jié) 聚丙烯酰胺凝膠電泳
一、聚丙烯酰胺凝膠的特點
二、凝膠聚合的原理及有關(guān)特性
三、PAGE原理
四、SDS-PAGE原理
五、聚丙烯酰胺凝膠等電聚焦電泳原理
六、聚丙烯酰胺凝膠雙向電泳原理
第五節(jié) 高效毛細(xì)管電泳
一、基本原理
二、實驗方法
三、分離類型及應(yīng)用
第六節(jié) 免疫分析技術(shù)
一、抗體的性質(zhì)和制備
二、抗原抗體反應(yīng)
實驗4-1 血清蛋白的乙酸纖維素薄膜電泳
實驗4-2 垂直板PAGE分離血清蛋白
實驗4-3 SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量
實驗4-4 等電聚焦電泳測定血清蛋白質(zhì)等電點
實驗4-5 DNA的瓊脂糖凝膠電泳
實驗4-6 PAGE分離RNA
實驗4-7 對流免疫電泳法測定胎兒甲種球蛋白
實驗4-8 火箭免疫電泳法測定抗原含量
第五章 分子生物學(xué)基本技術(shù)
第一節(jié) DNA的體外合成
一、DNA的化學(xué)合成
二、聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)
第二節(jié) 核酸的分子雜交
一、探針的種類與選擇
二、標(biāo)記物的選擇
三、探針的放射性同位素標(biāo)記
四、探針的非放射性標(biāo)記
五、膜上印跡雜交的條件選擇
六、雜交信號的檢測
七、DNA芯片技術(shù)及應(yīng)用
第三節(jié) 基因克隆
一、目的基因的來源
二、常用的克隆載體
三、DNA分子的體外連接
四、重組子導(dǎo)人受體細(xì)胞
五、重組子的篩選
六、基因組文庫的構(gòu)建
七、cDNA文庫的構(gòu)建
第四節(jié) 基因表達(dá)
一、原核生物的表達(dá)載體
二、用于原核細(xì)胞表達(dá)的外源基因
三、提高表達(dá)水平的措施
四、外源基因在酵母細(xì)胞中的表達(dá)
五、外源基因在昆蟲桿狀病毒中的表達(dá)
六、外源基因在哺乳動物細(xì)胞中的表達(dá)
第五節(jié) 轉(zhuǎn)基因植物和轉(zhuǎn)基因動物
一、轉(zhuǎn)基因植物
二、轉(zhuǎn)基因動物
第六節(jié) 基因組學(xué)的研究方法
一、核酸的序列測定
二、結(jié)構(gòu)基因組學(xué)
三、功能基因組學(xué)
第七節(jié) 轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究技術(shù)
一、基因功能狀態(tài)的研究方法
二、順式作用元件與反式作用因子的分析方法
實驗5-1 植物基因組DNA的提取
實驗5-2 動物基因組DNA的提取
實驗5-3 細(xì)菌基因組DNA的提取
實驗5-4 質(zhì)粒DNA的提取
實驗5-5 大腸桿菌的轉(zhuǎn)化
實驗5-6 質(zhì)粒DNA的酶切及電泳鑒定
實驗5-7 質(zhì)粒DNA的分子雜交
實驗5-8 使用光敏生物素探針的Southern雜交
實驗5-9 DNA重組
實驗5-10 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)
實驗5-11 外源基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)
第六章 綜合性實驗和設(shè)計性實驗
實驗6-1 溶菌酶的分離純化
實驗6-2 超氧化物歧化酶的分離純化和同工酶分析
實驗6-3 利用PCR差異顯示mRNA
實驗6-4 cDNA文庫的構(gòu)建
實驗6-5 蛋白質(zhì)印跡分析
實驗6-6 蛋白質(zhì)的雙向凝膠電泳
附錄一 實驗數(shù)據(jù)的處理
附錄二 調(diào)整硫酸銨溶液飽和度計算表（25℃）
附錄三 換算轉(zhuǎn)速、相對離心力和轉(zhuǎn)子半徑的列線圖
附錄四 常見生化物質(zhì)電泳后的染色方法
附錄五 常用緩沖液的配制
參考書目