基因表達技術

叢書序Ⅰ
叢書序Ⅱ
前言
第一章大腸桿菌表達系統(tǒng)
一、表達載體的構成
(一)復制子
(二)篩選標記
(三)啟動子和終止子
(四)核糖體結合位點
二、各種類型表達系統(tǒng)的構成及特點
(一)Lac和Tac表達系統(tǒng)
(二)PL和PR表達系統(tǒng)
(三)T7表達系統(tǒng)
(四)其他表達系統(tǒng)
三、目標蛋白表達的形式和在細胞中的位置
四、高效表達目標基因的戰(zhàn)略和技術
(一)表達質粒的優(yōu)化設計
(二)共表達大腸桿菌稀有密碼子tRNA基因
(三)提高目標基因mRNA和目標基因產(chǎn)物的穩(wěn)定性
(四)高密度發(fā)酵和工程化宿主細胞
五、大腸桿菌表達系統(tǒng)研究的發(fā)展趨勢
第二章芽孢桿菌表達系統(tǒng)
一、發(fā)展簡史
二、表達概述
(一)特點
(二)宿主菌株
(三)載體
三、基因表達
(一)基因表達的特點
(二)已表達的克隆基因
(三)蛋白質工程
四、存在問題及今后發(fā)展方向
(一)關于表達真核基因方面
(二)關于表達酶的方面
(三)關于表達殺蟲菌晶體蛋白(ICP)方面
(四)關于致病菌炭疽芽孢桿菌方面
(五)利用芽孢桿菌基因工程技術擴大和加強芽孢桿菌在各方面的應用
第三章鏈霉菌基因表達系統(tǒng)
一、鏈霉菌的生物學特征
二、鏈霉菌基因克隆系統(tǒng)
(一)鏈霉菌的載體
(二)鏈霉菌的基因轉移的方法
三、鏈霉菌基因的調控和蛋白質的分泌表達
(一)RNA聚合酶基因多樣性
(二)調節(jié)基因
(三)調節(jié)因子
(四)鏈霉菌基因的轉錄調控
(五)鏈霉菌中的蛋白外泌系統(tǒng)
四、外源基因在鏈霉菌中的表達
(一)同種異源基因的表達
(二)異種外源基因的表達
五、影響鏈霉菌中基因表達的因素
(一)啟動子對外源基因表達的影響
(二)信號肽對外源蛋白分泌的影響
(三)密碼子、SD序列和終止子等對基因表達的影響
(四)DNA壙增序列對基因表達的影響
(五)發(fā)酵條件對外源基因表達的影響
六、鏈霉菌基因表達翻譯的后修飾
(一)對外源蛋白的糖基化
(二)對外源蛋白的降解
七、鏈霉菌作為表達系統(tǒng)的優(yōu)缺點及研究發(fā)展趨勢
第四章 原核生物增強子樣系列
一、基因轉錄調節(jié)的兩類基本元件
(一)啟動子元件
(二)增強子元件
二、原核基因表達調節(jié)的一些見解
三、來源于動物病毒基因序列和大腸桿菌染色體的大腸桿菌增強子
(V??EE和E??EE)
四、λPL和trp啟動子上游AT豐富區(qū)的增強子樣效應
五、hylR增強子
六、固氮基因的原核增強子
七、T4噬蓖體晚期基因轉錄增強子
八、原核增強子樣序列的應用
第五章酵母表達系統(tǒng)
一、酵母基因表達系統(tǒng)的概況
(一)酵母載體的基本結構
(二)酵母表達系統(tǒng)中載體的種類
(三)酵母菌基因表達系統(tǒng)的宿主
(四)酵母的DNA轉化
二、酵母表達系統(tǒng)研究進展
(一)外源基因在酵母中的高表達
(二)提高外源基因表達產(chǎn)物的質量
(三)酵母表達系統(tǒng)的新應用
三、結束語
第六章絲狀真菌基因工程
一、載體和轉化方法
(一)載體
(二)轉化方法
(三)提高轉化頻率的方法
(四)轉化DNA的歸宿
二、基因的結構和功能
(一)轉錄
(二)翻譯起始和終止
(三)基因的染色體排列和定位
(四)基因的染色體排列和定位
(五)基因表達的調控
三、次級代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)
(一)β-內(nèi)酰胺抗生素
(二)多肽代謝物
四、外源蛋白在真菌中的表達
(一)工業(yè)用酶
(二)醫(yī)療用蛋白酶
五、展望
第七章昆蟲表達系統(tǒng)
一、歷史回顧
二、最新進展
(一)重組病毒獲得的技術途徑及載移載體的發(fā)展
(二)病毒載體的虱進
(三)昆蟲細胞培養(yǎng)技術和穩(wěn)定表達系統(tǒng)
(四)自主式昆蟲宿主反應器
(五)桿狀病毒在蛋白質結構和功能上的研究
(六)昆蟲病毒表達系統(tǒng)用于多肽藥物和疫苗研制
三、今后方向
第八章哺乳動物細胞表達系統(tǒng)
一、概述
二、哺乳動物細胞表達系統(tǒng)
(一)宿主細胞
(二)表達載體的構建和常用的細胞表達系統(tǒng)
(三)主表達細胞株的基因共壙增和篩選方法
三、展望
(一)改進表達載體，提高表達水平和產(chǎn)量
(二)利用代謝工程，改進培養(yǎng)工藝，降低生產(chǎn)成本
(三)抑制細胞凋亡，延長培養(yǎng)周期
(四)采用“糖基化”工程，提高產(chǎn)品質量
第九章轉基因動物與基因表達
一、轉基因動物概述
(一)轉基因動物發(fā)展簡史
(二)什么是轉基因動物
(三)有關轉基因動物的倫理學問題
二、轉基因方法
(一)顯微注射
(二)通過動物體細胞克隆生產(chǎn)轉基因動物
(三)其他轉基因方法
三、基因整合
(一)隨機整合
(二)同源重組
四、動物基因表達的基礎知識
(一)組織特異性表達
(二)染色質的結構
(三)真核基因的表達過程
五、外源基因的表達
(一)真核基因表達的調控序列
(二)表達結構的構建和功能域轉移
六、轉基因動物在生物工程產(chǎn)業(yè)中的應用前景
(一)提高家畜的生長速度和飼料轉化效率
(二)生產(chǎn)藥用蛋白質
(三)人工改良牛奶
(四)器官供應來源
第十章植物生長反應器
一、引言
二、基本原理、方法
(一)轉化方法
(二)轉基因的構建
三、進展、問題與對策
(一)國內(nèi)外研究、應用用展
(二)問題與對策
四、總結
第十一章基因治療中的基因表達問題
一、基因治療概況
(一)基因治療的概念和適應癥
(二)基因治療的策略
(三)臨床項目的現(xiàn)狀與評價
二、基因治療載體系統(tǒng)的種類和特點
(一)病毒載體
(二)非病毒載體
(三)基因導入體內(nèi)新途徑
三、靶向性問題
(一)靶向導入型載體
(二)靶向性表達
四、基因表達調控問題
(一)可誘導表達系統(tǒng)
(二)特異反應性啟動子誘導表達系統(tǒng)
(三)調控序列對基因表達的影響
(四)目的基因體內(nèi)長期表達的問題
五、小結與展望
第十二章基因表達與發(fā)酵
一、基因重組菌的穩(wěn)定性
(一)培養(yǎng)過程中重組菌穩(wěn)定性對群體組成變化的影響
(二)培養(yǎng)條件對穩(wěn)定性的影響
二、影響外源基因表達的因素
(一)培養(yǎng)基
(二)比生長速率
(三)溶氧
(四)溫度
(五)外源基因表達的誘導強度
(六)代謝副產(chǎn)物的影響
(七)重組菌的穩(wěn)定性
三、發(fā)酵過程的優(yōu)化和控制
(一)高密度培養(yǎng)
(二)代謝副產(chǎn)物生成的防止
(三)發(fā)酵過程的控制
(四)培養(yǎng)的操作方式
(五)展望
第十三章基因表達技術中的序列數(shù)據(jù)分析方法
一、前言
二、序列數(shù)據(jù)分析方法的概述
(一)基因工程實驗中的模擬
(二)PCR的計算機設計方法
(三)序列比較方法
(四)外源基因表達水平的分析
(五)蛋白質性質的分析